豬乙型腦炎病毒ELISA抗體檢測試劑盒使用說明書
【簡介】
試劑盒由抗原包被板，羊抗豬酶標二抗及其它試劑制成，應用間接ELISA檢測豬血清中抗乙型腦炎病毒抗體。
【用途】
用于檢測豬血清中乙型腦炎病毒抗體，適用于豬場乙型腦炎疫苗免疫狀況的評價以及感染豬的血清學診斷。
【原理】
本試劑盒是采用豬乙型腦炎病毒純化后包被微孔板，在試驗中，加入稀釋的對照血清和待檢血清，經溫育后，若樣品中含有豬乙型腦炎病毒特異性抗體，則將與檢測板上抗原結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后；再加入酶標二抗，與檢測板上抗原抗體復合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶結合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產物，加入HF溶液終止反應后，用酶標儀630nm波長測定各反應孔中的OD值。
【試劑盒主要成分】
1 抗原包被板 2塊 （96孔/塊）
2 陰性對照血清 （藍色蓋子） 1管 （0.5ml/管）
3 陽性對照血清 （紅色蓋子） 1管 （0.5ml/管）
4 羊抗豬酶標二抗（藍色蓋子） 1瓶 （20ml/瓶）
5 20倍濃縮洗滌液（白色蓋子） 1瓶 （30ml/瓶）
6 底物液A（紅色蓋子） 1瓶 （10ml/瓶）
7 底物液B（黑色蓋子） 1瓶 （10ml/瓶）
8 終止液（藍色蓋子） 1瓶 （10ml/瓶）
9 樣品稀釋液（黃色蓋子） 1瓶 （50ml/瓶）
10 血清稀釋板 2塊 （96孔/板）
11 說明書 1張
【樣品制備】
取動物全血，按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。
【洗滌液配制】
使用前，濃縮的洗滌液應恢復至室溫（25℃左右），并搖動使沉淀的鹽溶解（在37℃水中加熱5~10分鐘），然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋（例如：每板用20 ml濃縮液加上380ml水），稀釋好的洗滌液在2~8℃可以存放7天。
【樣品和對照稀釋】
樣品稀釋：在血清稀釋板中按1:40的體積稀釋待檢血清樣品（195μl樣品稀釋液中加5μl待檢血清樣品）。
對照稀釋：在血清稀釋板中按1:40分別稀釋陽性對照和陰性對照（234μl樣品稀釋液中加6μl對照血清）。
【注意事項】
1 試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫，使用后放回2~8℃。
2 不同批號試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時應防止試劑污染。
3 不要用口移液。
4 底物液B不要暴露于強光，避免接觸氧化劑。
5 未使用的抗原包被板切記不要撕開上面的封口膜。
6 待檢血清樣品數量較多時，應先使用血清稀釋板稀釋完所有要檢測血清，再將稀釋好的血清轉移到檢測板，使反應時間一致。
7 濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋，如果發現有結晶加熱使其溶解后再使用。
8 嚴格按照操作說明書可以獲得的結果。
【操作步驟】
1 取抗原包被板（根據樣品多少，可拆開分次使用），每孔加入稀釋好的洗滌液200μl,靜置3分鐘倒掉液體，并在吸水紙上拍干。再分別將稀釋好的待檢血清和對照各取100μl加入到抗原包被板孔中，待檢樣品做1孔，陰性對照和陽性對照各設2孔，每孔100μl.輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置37℃溫育30分鐘。
2 甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200μl,靜置3分鐘倒掉，再在吸水紙上拍干，共計洗滌5次，
3 每孔加羊抗豬酶標二抗100μl,置37℃溫育30分鐘。
4 洗滌5次， 方法同2.切記每次在干凈吸水紙上拍干。
5 每孔先加底物液A一滴（50?l）、再加底物液B一滴（50?l），混勻，室溫（18℃~25℃）避光顯色10分鐘。
6 每孔加終止液一滴（50μl），10分鐘內測定結果（測定前在震蕩器上輕輕震動一下）。
【結果判定】 在酶標儀上測各孔OD630nm值。試驗成立的條件是陽性對照孔平均OD630nm值0.6,陰性對照孔平均OD630nm值必須<0.3.
樣品OD630nm值≥0.32,判為陽性；樣品OD630nm值<0.32,判為陰性。
注意：用620~650納米波長測定結果均有效。
【貯 存】 2~8℃避光保存
【有 效 期】 10個月
【生產企業】 武漢科前動物生物制品有限責任公司